RNA 5-甲基胞嘧啶修飾作為一種重要的轉(zhuǎn)錄后修飾，廣泛分布于rRNA、tRNA和mRNA上，對基因表達(dá)調(diào)控具有重要影響。

傳統(tǒng)的m5C檢測方法主要依賴于亞硫酸氫鹽測序，該方法雖然能實現(xiàn)單堿基分辨率的m5C修飾定量檢測，但存在諸多不足，如間接檢測導(dǎo)致的假陽性、反應(yīng)條件苛刻引發(fā)的RNA降解，以及序列復(fù)雜度降低影響比對準(zhǔn)確度等。

m5C-TAC-seq技術(shù)的核心原理是將酶促反應(yīng)與化學(xué)標(biāo)記相結(jié)合，利用優(yōu)化后的TET酶促反應(yīng)將RNA m5C氧化至f5C，并進(jìn)一步使用疊氮茚二酮對氧化產(chǎn)生的f5C進(jìn)行特異性標(biāo)記。

標(biāo)記產(chǎn)物不僅能產(chǎn)生C-to-T的轉(zhuǎn)變，還可以通過點擊化學(xué)反應(yīng)進(jìn)行富集，從而實現(xiàn)m5C修飾的單堿基分辨率直接檢測。這一技術(shù)能夠靈敏地檢測修飾比例低至2.5%的位點，且具有反應(yīng)條件溫和、不影響轉(zhuǎn)錄組堿基組成的特點，因此適用于低豐度和低序列復(fù)雜度的轉(zhuǎn)錄本。

m5C-TAC-seq技術(shù)還結(jié)合了multiplexing文庫構(gòu)建策略，減少了樣品之間的技術(shù)誤差，并實現(xiàn)了m5C修飾的半定量檢測。

研究人員利用該技術(shù)繪制了HeLa、HEK293T和mESC的單堿基分辨率m5C修飾圖譜，驗證了其高靈敏度和高精度。這一新技術(shù)的開發(fā)為全面理解RNA m5C修飾的生物學(xué)功能提供了強(qiáng)有力的工具，并有望推動相關(guān)領(lǐng)域的深入研究。